Mi experiencia

En este blog decidí hablar  de la preparación de los medios de cultivo que son utilizados en  bacteriología.

La bacteriología  se estudia  en la carrera de Licenciatura en Laboratorio Clínico, de la cual me gradué.
 El Laboratorio clínico,  es un área medica muy bonita de la cual me siento muy orgullosa de pertenecer y por supuesto trabajar en la preparación de los medios de cultivo y su utilización.

La buena preparación de los medios de cultivo nos ayuda para poder dar un buen diagnóstico y tratamiento  a los pacientes, tanto adultos como niños.

Con la  preparación de los medios de cultivo he obtenido muchos tipos de bacterias, las cuales podemos identificar en equipos automatizados. 

Podemos encontrar bacterias como:  Escherichia coli,  que son bacilos Gram negativos y  Staphylococcus sp. que son cocos Gram positivos.

                                                                               

Bacilos Gram negativos.

               

Bacilos Gram positivos.

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Tioglicolato

Caldo de tioglicolato

Es un medio líquido de enriquecimiento para crecimiento bacteriológico.


Componentes:

Peptona------------------------------------ 20 grs.

Lecitina------------------------------------ 0.25 grs.

Glucosa------------------------------------ 6 grs.

Cloruro de sodio------------------------- 2.5 grs.

Tioglicolato de sodio-------------------- 0.5 grs.

Sulfito de sodio--------------------------- 0.1 grs.

Agar----------------------------------------- 0.7 grs.

Agua destilada--------------------------- 1000 mL


Preparación:

 Disolver 30 grs. en 1000 mL de agua desmineralizada.

Dispensar en tubos de tapón de rosca, aproximadamente 5 mL del caldo, luego autoclavear a 121ºC por 15 minutos.

Caldo de tioglicolato.

Equipo

Material y equipo para preparaduría.

Sangre de carnero.

Proteínas para el medio de chocolate.

Balones y Erlenmeyer.

Placas Petrí.

Balanza.

Caldo.

Tripticasa soya.

Medio de cultivo para el crecimiento de las bacterias.

 
Contenido:

 Tripticasa------------------ 17 grs.
  Pheptone------------------- 3 grs.
  Cloruro de sodio--------- 5 grs.
  Fosfato dipotásico------- 2.5 grs.
  Glucosa-------------------- 2.5 grs.
  Agua destilada----------- 1000 mL

  Preparación:

 30grs ------------------- 1000 mL de agua destilada

Dispensar el medio en tubos con tapón de rosca de 10-15 mL y esterilizar a 15 lb. de presión durante 15 minutos.

Caldo de tripticasa soya.

Chocolate.

Agar.

Este es un medio enriquecido, que permite el crecimiento de la mayoría de las bacterias.

Componentes:

  Hemoglobina (BBL;DIFCO;OXOID)
  Suplemento nutritivo o proteínas
  Agua destilada  

Preparación :

GC médium para 500 mL pesar 36 grs.

Hemoglobina para 500 mL pesar 10 grs.

Se coloca el medio ya disuelto por 30 minutos en un rotador de serología. Después, calentarlo a que de un hervor aproximadamente. Se pone en el autoclave por separado GCM (en dos balones) y la hemoglobina; se dan unos 4 dobleces a la gasa y ésta se coloca en un embudo esterilizado previamente,  la gasa en el embudo  filtra la hemoglobina para quitarle los escombros. Agregarlo al GCM y se espera a que se enfrié y luego se le agrega el Bacto Suplemento VX y se vierte en las placas.  

         

Proteínas.

proteinas o suplementos.

Placas de Agar Chocolate.

Medio sólido.

Agar tripticasa soya.

Es un medio útil para el aislamiento y mantenimiento de casi todos los microorganismos, además es excelente como base para agar sangre,  este medio es usado para el aislamiento y estudio de microorganismos, ya sea que posee la capacidad hemolítica haciéndolo un medio diferencial.

Componentes:

  Medio base para agar sangre---------- 40 grs.

  Agua destilada----------------------------- 1000 mL

  Sangre de carnero 5%------------------- 50 cc.

   Preparación:

Dejar enfriar el medio ya estéril a 45ºC – 50 ºC, posteriormente añadir 50 cc de sangre de carnero 5% estéril a 1000 ml del medio y mezclar suavemente, luego verter en placas de Petri estériles aproximadamente 15 cc en cada placa de Petri.

La preparación debe realizarse en un cuarto cerrado y en un área cerca del mechero para evitar contaminación en las placas.

Finalmente se rotulan las placas colocando la fecha de elaboración y el número de lote .

 

Sangre de carnero al 5%

Placas de agar sangre.

 

MacConkey

Agar macConkey.

Es un medio en el cual las bacterias lactosa positiva forman colonias color rosado y las lactosa negativas forman colonias incoloras.
Sirve para el aislamiento de Salmonella, Shigella y bacterias coliformes.
Es un medio selectivo y diferencial. Selectivo porque solo crecen bacilos gramnegativos y diferencial porque separa los fermentadores de la lactosa  no fermentadores.


Componentes:

 Peptona de caseina ------------- 17 grs.
Peptona de carne------------------ 3.0 grs.
Cloruro sódico--------------------- -5.0 grs.
Lactosa------------------------------ -10 grs.
Mezcla de sales biliares-------- -1.5 grs.
Rojo neutro-------------------------- 0.03 grs.
Violeta cristal-------------------------0.001 grs.




 Preparación:

 Disolver 50 grs. del medio de cultivo en un litro de agua desmineralizada, calentando en un baño de agua hirviendo, tratar en el autoclave durante 15 minutos a 121 ºC.

Dispensar 15ml del medio en placas de Petri pequeñas de 16x91 y realizar la prueba de esterilidad poniéndola en la estufa por 24 horas, también debe inocularse en otra placa una cepa conocida de lactosa positiva y otra de lactosa negativa para probar la capacidad diferencial que tiene el medio.

 

Placas de Agar MacConkey.

Medios refrigerados.