Urea

Caldo.

Este medio líquido  se utiliza  para demostrar la producción de ureasa por especies del género Proteus. También sirve para detectar cantidades pequeñas de ureasa producidas por otras bacterias entéricas, diferenciándolas de la Shigella y Salmonella que son ureasa negativa, además se utiliza para identificar las especies de Cryptococcus que son ureasa positiva.

Contenido:

Urea --------------------------------- 20 grs.
Fosfato mono potásico ---------- 9.1 grs.
Fosfato di sódico ------------------ 9.5 grs.
Extracto de levadura ------------ 0.1 grs.
Rojo fenol -------------------------- 0.01 grs.
Agua destilada ------------------- 1000 ml

Preparación:

3.87 grs ---- 100 ml de agua destilada (no hervir)

Autoclaviar primero los tubos  y luego colocar 2 mL en cada tubo de rosca del medio ya preparado.

Calado de Urea.

 

Esterilidad.

Se lleva un control de esterilidad de placas de medios de cultivo, dicho control se realiza en cada preparación, por ejemplo: las placas de Agar Sangre y MacConkey se incuban a 36 ± 1ºC por 24 horas, posteriormente los resultados se anotarán en la hoja de registro correspondiente.
Todas las placas que se preparan se debe identificar con el número de lote y la fecha de preparación, las placas se van utilizando según la fecha en que han sido elaboradas, dejando en reserva las de fecha mas reciente y utilizando las de fechas mas antiguas. Además se realizan controles de crecimiento de cepas ATCC conocidas .

En un placa de Agar sangre se siembra una cepa  ATCC de cocos

 (Staphylococcous aureus).

y en otra placa de MacConkey sembrar una cepa ATCC de un bacilo

 ( Escherichia coli).

.

Medios refrigerados listos para usar.

Bacilos Gram negativos.  

Lactosa positiva.

 Cocos Gram positivos.

  Cocos Gram positivos.

Citrato.

Agar citrato.

Este medio es usado para estudiar la capacidad de utilización de citrato, como única fuente de carbono por las bacterias.

Contenido:

Agar(medio solido)--------------------------- 20 grs.
Cloruro de sodio------------------------------- 5 grs.
Sulfato de magnesio---------------------------0.2 grs.
Fosfato deshidrogenado de amonio ------1 gr.
Fosfato dipotásico------------------------------1gr.
Citrato de sodio---------------------------------2 grs.
Azul de bromo timol----------------------------0.08 grs.
Agua destilada-----------------------------------1000 mL

Preparación:

 
Disuelva el medio y dispénselo en tubos con tapón de rosca, inclinarlos para que se forme el bisel.

Control de calidad:

 

  A. control positivo :   Enterobacter aerogenes.
  B. Control negativo : Escherichia coli.

 

Citrato.

    

Tsi.

Agar tres azúcares y hierro (TSI)

Este medio se utiliza para determinar la fermentación de carbohidratos y la producción de sulfuro de hierro, como el primer paso en la identificación de los bacilos Gramnegativos.


Contenido:

Peptona -------------------------------- 20 grs.
Cloruro de sodio --------------------- 5 grs.
Lactosa --------------------------------- 10 grs.
Sucrosa -------------------------------- 10 grs.
Glucosa -------------------------------- 1 gr.
Sulfato de amonio ferroso --------- 0.2 grs.
Trisulfato de sodio ------------------- 0.2 grs.
Rojo fenol ------------------------------ 0.025 grs.
Agar ------------------------------------- 13 grs.
Agua destilada ------------------------ 1000 ml


Preparación:

Disolver el medio y dispensar en tubos con tapón de rosca. Esterilizar a 15 ºC durante 15 minutos, una vez esterilizados deben colocarse inclinados para que se forme el bisel.
 

Agar tres Azúcares y hierro.

Virtiendo.

  Medio en placas.

Generalidades.

Los medios de cultivo pueden prepararse utilizando los ingredientes que se detallan en la fórmula respectiva o usando medios deshidratados comerciales (BBL, DIFCO;MERCK, etc.). Se debe pesar las cantidades específicas de cada medio de cultivo y disolverlas en agua destilada utilizando un Erlenmeyer de tamaño adecuado, para la disolución es necesario agitar y calentar el medio hasta ebullición, procurando que no se queme ni se derrame. El calentamiento puede hacerse en un mechero, cocina o baño de maría; la agitación del medio se hace con la mano enguantada tomando el Erlenmeyer por el cuello y realizando movimientos rotatorios (el medio bien disuelto es transparente y no granular). Si el medio se va a dispensar en tubos debe hacerse antes de esterilizarlo usando un Becker o un embudo.

Si se va a dispensar el medio en placas de Petri, éste debe esterilizarse en un Erlenmeyer, luego dejarlo enfriar a 50ºC aproximadamente para evitar que se forme vapor de condensación en las placas.

El vaciado del medio requiere algunos ingredientes termolábiles como sangre, suero, carbohidratos, urea, etc. ;estos deben agregarse después que el medio ha sido esterilizado y enfriado a 45ºC ó 50 ºC, excepto cuando se prepara agar chocolate ya que entonces la sangre se agrega cuando el medio esta a 80ºC.
Es de suma importancia en la preparación de cada medio el esterilizarlo con la técnica que se especifique en las instrucciones, incluyendo temperatura y el tiempo indicado. Alteraciones en la esterilización puede arruinar el medio e impedir que proporcione un servicio satisfactorio.

Los medios preparados deben guardarse en la refrigeradora convenientemente identificados con la fecha de preparación y el número de lote.

 Erlenmeyer.

 Placas Petri.

 Esterilizador.

  Preparación de medios de cultivo.

Frascos

La preparaduría es básica para proporcionar los medios necesarios en el área de bacteriología por la que su calidad debe ser estrictamente buena para garantizar que los resultados sean fidedignos, así  de esta manera estaremos contribuyendo a un buen diagnóstico y tratamiento  de la paciente y el recién nacido.

La preparación de los medios de cultivos se realiza a partir  medios deshidratados siguiendo las instrucciones que vienen en cada uno de los frascos.

Frascos de medios de cultivo.